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  • 沙門氏菌檢驗注意事項:生化鑒定三糖鐵瓊脂

    發布時間:

    2022-12-27

    作者:

    山東培養基生產廠家


    檢驗步驟及注意事項:生化鑒定三糖鐵瓊脂

    三糖鐵瓊脂

    反應原理:
    蛋白胨、牛肉粉、酵母粉和?胨提供氮源、維生素、礦物質;乳糖、葡萄糖、蔗糖為可發酵糖類,其產酸時通過酚紅指示劑測出,酸性呈黃色,堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫,與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;糖發酵有氣體產生,且指示劑由紅變黃,本產品葡萄糖、乳糖和蔗糖比例為1:10:10;發酵葡萄糖的試管底部變黃,斜面產生的少量的酸因被空氣中的氧迅速氧化,從而導致斜面保持紅色或恢復到堿性pH,在有限的葡萄糖耗盡后,微生物如果可利用乳糖或蔗糖,則斜面因糖發酵產酸而變黃;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑。
     
    質控菌株和反應現象
    a:腸炎沙門氏菌,生長良好,K/A、H2S+、產氣
    b:大腸埃希氏菌,生長良好,A/A、H2S-、產氣
    c:普通變形桿菌,生長良好,A/A、H2S+、產氣
    d:福氏志賀氏菌,生長良好,K/A、H2S-、不產氣
    e:銅綠假單胞菌,生長良好,K/K、H2S-、不產氣
    f:空白對照
     
    尿素瓊脂(pH7.2)

     反應原理:

    KH2PO4作為緩沖劑中和細菌代謝蛋白胨產生的堿,腸桿菌利用葡萄糖產酸,也會中和其代謝蛋白胨產生的堿,同時可以激發尿素酶活性,酚紅為酸堿指示劑。某些細菌能產生尿素酶水解尿素,生成堿性碳酸銨,從而使培養基由橙紅色變成粉紅色。
     
    質控菌株名稱生和化反應結果
    大腸埃希氏菌(左二)陰性:培養基變黃
    奇異變形桿菌(中)陽性:培養基變粉紅色
    肺炎克雷伯氏菌(右二)弱陽性:斜面處變粉
    鼠傷寒沙門氏菌(右一)陰性:培養基變黃
    氰化鉀培養基
    原理:某些細菌的呼吸鏈酶系統可被一定濃度(0.1‰)的氰化鉀抑制而導致細菌不能生長。還有某些細菌不被氰化鉀抑制,所以在有氰化鉀存在的情況下仍能生長,可以以此鑒別細菌。
     
    注意事項:1、一株待檢菌需同時接種氰化鉀試驗管和氰化鉀對照管各一支。2、兩管均需滴加無菌液體石蠟覆蓋液面,因為氰化鉀易分解,產生氫氰酸,易揮發,影響試劑濃度。
     
    質控菌株名稱、菌號、試驗管/對照管和結果判定
    鼠傷寒沙門氏菌
    ATCC 13311
    抑制/生長
    -
    大腸埃希氏菌
    ATCC 1 0536
    抑制/生長
    -
    弗氏檸檬酸桿菌
    ATCC 43864
    生長/生長
    +
     
     
    關于氰化鉀生長試驗的安全性說明
    氰化鉀劇毒。健康危害:抑制呼吸酶,造成細胞內窒息。吸入、口服或經皮吸收均可引起急性中毒。
    廢棄處理:每管加入0.5mL40%氫氧化鉀溶液和數粒硫酸亞鐵,反應數小時后滅菌,然后才可清洗。
     

    蛋白胨水(靛基質試驗)

    原理:某些細菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚(靛基質),當加入吲哚試劑(對位二甲氨基苯甲醛)后則形成紅色的玫瑰吲哚。
    質控菌株和生化特征
    大腸埃希氏菌:陽性,滴加靛基質試劑,顯紅色
    鼠傷寒沙門氏菌:陰性,滴加靛基質試劑,黃色
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