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  • 配制胰胳大豆胨瓊脂培養基平皿需要放置多長時間?

    發布時間:

    2022-12-27

    作者:


    配制胰胳大豆胨瓊脂培養基平皿需要放置多長時間?
     
    根據GB16294,碟子的數量按照面積有劃分,培養基種類沒有具體規定,大部分企業使用的是TSA的,擺放時間國標上有說明,GMP附錄部分也做了相應的規定。GMP有提碟子放置時間不宜過短,暴露時間至少為30分鐘,不大于4小時。應對沉降碟的暴露時間進行確認,保證不會因為失水等原因影響微生物生長。所以還是得對沉降碟的暴露時間進行確認。
     
    沉降菌監測分動態和靜態,動態自己定多少個監測點,但一定要保持生產中連續監測,一般培養皿最長可以放4個小時。靜態一般一個房間2個監測點,但A級最少要14個培養皿。靜態一般30分鐘就可以了。
     
    沉降菌計數是4小時累計計數,單個碟子放置的時間應該根據自己所做的驗證決定,可以半小時,也可以4小時,也可以更長。放置時間還要考慮沉降碟是否在放置時間內失效,有些廠家生產的沉降碟放置四小時培養基會變干。
     
    單個碟子的暴露時間可以少于4小時,取決于你的取樣環境,如風速過快培養基水分流失快,影響培養基回收率。如放了4小時后回收率都達不到,從而影響結果準確性;同一位置可以使用多個沉降碟連續進行監測并累積計數。一般是用單個碟子暴露4小時,考察成品平板供應商也會做這個考慮的。
     
    一般培養皿適用性試驗中還要做,培養皿在潔凈區放置4小時(看公司的規定)后,加菌液,計算回收率,如果大于70%,則證明可以放置4小時。
    日水培養皿圖片
    建議參考GB/T 16294—1996醫藥工業潔凈室(區)沉降菌的測試方法
    采樣方法:將已制備好的培養皿按5.4.1.2的要求放置,打開培養皿蓋,使培養基表面暴露0.5小時,再將培養皿蓋蓋上后倒置。
    采樣點的布置:采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。工作區采樣點的位置離地0.8米至1.5米左右(略高于工作面)。可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。
     
    另外,培養皿里面用的瓊脂,時間長了自然會干了,即使再加純凈水也不好用了,只能報廢。
    ***平板計數瓊脂培養基滅菌后放置一段時間,里面出現毛絨絨的絮狀物原因是:平板計數瓊脂培養基的滅菌溫度121攝氏度,時間15-30分鐘。這是滅菌常用的時間溫度,在培養基不含糖并且各種成分均相對耐熱的情況下均使用這一溫度和時間。
     
    知識百科普及:培養皿是一種用于微生物或細胞培養的實驗室器皿,由一個平面圓盤狀的底和一個蓋組成,一般用玻璃或塑料制成。培養皿材質基本上分為兩類,主要為塑料和玻璃的,玻璃的可以用于植物材料、微生物培養和動物細胞的貼壁培養也可能用到。塑料的可能是聚乙烯材料的,有一次性的和多次使用的,適合實驗室接種、劃線、分離細菌的操作,可以用于植物材料的培養。
     
    培養皿材質基本上分為兩類,主要為塑料和玻璃的,玻璃的可以用于植物材料、微生物培養和動物細胞的貼壁培養也可能用到。塑料的可能是聚乙烯材料的,有一次性的和多次使用的,適合實驗室接種、劃線、分離細菌的操作,可以用于植物材料的培養。
     
    培養皿清潔步驟:
     
    浸泡:新的或用過的玻璃器皿要先用清水浸泡,軟化和溶解附著物。新玻璃器皿使用前得先用自來水簡單刷洗,然后用5%鹽酸浸泡過夜;用過的玻璃器皿往往附有大量蛋白質和油脂,干涸后不易刷洗掉,故用后應立即浸入清水中備刷洗。
    刷洗:將浸泡后的玻璃器皿放到洗滌劑水中,用軟毛刷反復刷洗。不要留死角,并防止破壞器皿表面的光潔度。將刷洗干凈的玻璃器皿洗凈、晾干,備浸酸。
    浸酸:浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中,又稱酸液,通過酸液的強氧化作用清除器皿表面的可能殘留物質。浸酸不應少于六小時,一般過夜或更長。放取器皿要小心。
    沖洗:刷洗和浸酸后的器皿都必須用水充分沖洗,浸酸后器皿是否沖洗的干凈,直接影響到細胞培養的成敗。手工洗滌浸酸后的器皿,每件器皿至少要反復“注水-倒空”15次以上,最后用重蒸水浸洗2-3次,晾干或烘干后包裝備用。
     
    來自:青島日水生物 
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