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  • 食品中沙門氏菌快速檢測方法的研究

    發布時間:

    2022-12-27

    作者:


    食品中沙門氏菌快速檢測方法的研究

    食品中沙門氏菌快速檢測重要性 
    沙門氏菌是腸桿菌科革蘭氏陰性桿菌,廣泛存在于環境或寄居于人和動物腸道內,絕大多數對人和動物具有致病性,對營養要求不高,耐膽鹽,對外界的抵抗力較強.感染沙門氏菌或食用被帶菌者糞便污染的食品,可使人發生食物中毒.帶菌者,或是感染沙門菌人的糞便會在一定程度上污染食物,導致人體食物中毒.沙門菌極易導致人體發生細菌性食物中毒,主要表現有敗血癥、腸胃炎以及腸傷寒等,而且具有一定的傳染性,可以通過消化道致病.沙門菌就從數量上來說是世界上比較常見的細菌種類之一,在我國,食物中毒問題中首要的也是由于沙門菌而產生的中毒問題,人類受到細菌感染的主要的來源也是受到沙門菌污染的相關食品,如:肉和奶等,因此食品、醫療衛生以及商檢等部門對沙門菌的檢測是相當嚴格.沙門氏菌中毒常常是大面積的,致病速度快,給人類健康帶來極大威脅.繁雜的各類生化反應型,使常規檢驗程序復雜繁瑣、耗時費力,不僅給檢驗部門帶來沉重的負擔,而且還使產品運轉和倉貯的時間延長,費用增加.提高檢測技術是有效控制該菌的重要手段,尤其是大面積普查時更需要快速簡便的檢測方法.沙門菌污染的快速檢測,一方面有利于減少食物中毒和保證食品衛生,另一方面有利于及早地發現傳染源,并有效的阻斷其傳播途徑.目前對沙門氏菌的治療為大量使用或濫用抗生素,從而忽視了對傳染源和傳播途徑的綜合防控,因此對沙門氏菌分離株耐藥性的監測是意義重大的. 
     
    快速檢測沙門氏菌的方法 
    國標法鑒定結果準確可靠是公認的,但因沙門氏菌血清型種類多,生化特異性大,使得檢驗程序更加復雜,檢驗過程需要反復的接種培養,一般都需要4~7天才能出結果.PCR技術篩選樣品中致病菌的檢測系統之一,優點在于特異性強,假陽性低,耗時短,從增菌到檢測48h內可出檢驗結果.在已知陽性可能性很高的情況下,適量增加分離平板數和提高劃線質量,著重對可疑菌進行檢測,有效提高檢測效率. 
     
    Transia法 
    沙門氏菌,最快的速度,操作時間可以縮短每個檢測.它是基于雙抗體夾心ELISA法中,使用的抗體的混合物,以確保所有沙門氏菌血清型的檢測.固態反應是一種微量反應板的有形或無形的條紋.特異的單克隆抗體用于沙門氏菌,收拾鎖孔.小在第一階段(沙門氏菌特異的單克隆抗體及多克隆抗體的混合物)與復雜的樣品和抗體.延時,沙門氏菌抗原和抗體包被的,以形成復合材料接頭組件:單克隆抗體沙門氏菌抗原-抗體.洗滌后,每孔為底物溶液(過氧化脲)和顯色溶液(四氨基甲基苯),以顯示復合酶催化氧化顯色,藍色.加入反應終止液終止催化反應后,將反應混合物酸化,從藍色到黃色的顏色變化. 
    ELISA方法可用于選擇性富集和熱沖擊的效果,沙門氏菌抗原特異的食品和環境樣品的釋放.如使用李Zhaogun的樣品制備方法,可大大縮短檢測時間,此方法可以在沒有酶標儀在實驗室條件下,從這個角度來看,ELISA微孔板Transia沙門氏菌板檢測方法的LiZhaogun(Salmonellatest1更適合于一般實驗室使用)免疫反應卡. 
     
    沙門氏菌Transia單,夾心免疫反應檢測方法 
    膜帶固相反應,包括抗沙門氏菌抗體染色染料共軛墊浸泡,抗沙門氏菌抗體固定膜反應區.濃縮,濃縮液移樣孔管,其吸收,如沙門氏菌抗原的存在的樣品,它們的效果和偶聯物,抗體,然后移動到膜的結合被固定在膜反應區,顯示在響應窗口的色帶.最后,結果可以讀取在5-7分鐘.該方法也適用于非酶標記儀器實驗室.樣品的制備方法,例如作為使用李Zhaogun,可以縮短檢測時間,可以在實驗室條件下進行. 
     
    實時熒光定量技術 
    實時熒光定量PCR技術是近年來廣泛應用于沙門氏菌快速檢測的一種方法.采用TaqManPCR擴增沙門氏菌D型菌株特有的sefA基因,使用該方法與常規培養法對經過同質加工處理的雞蛋樣本進行檢測,其結果與常規培養法獲得的結果100%一致.但是該方法只需要2天,而常規方法需要5天,而且在雞蛋樣本中的靈敏度為1CFU/600g,大大提高了低樣本量檢測效率.國內,李光偉等建立了快速、敏感、特異以及準確定量檢測沙門氏菌的FQ.PCR方法.采用沙門氏菌高度保守序列fimY,設計特異性引物和探針,通過對反應體系和條件的優化,然后進行特異性和適用性實驗.結果表明用FQ.PCR方法和國標法檢出的陽性樣本數和檢出率基本一致,準確率達99.17%.該FQ.PCR檢測試劑可應用于食品衛生監管、商品檢驗檢疫以及臨床診斷等領域.建立的實時熒光PCR檢測方法耗時約2h,是一種快速的檢測方法.通過檢測患者肛拭子標本,發現該方法對沒有經過增菌的標本檢測效率和經過增菌的檢測效率完全一致,而且靈敏度較高,在減少標本增菌時能明顯提高檢測陽性率.這一方法可以大大縮短報告結果的時間,快速鑒定突發性食物中毒事件中的病原體.基于inv基因簇設計的引物具屬特異性,可用于鑒別沙門菌,盡管與極少數沙門菌菌株缺少invA基因的實驗結果有矛盾,但通過檢查invA基因來確定沙門菌的存在已經成為共識. 
     
    結束語 
    食品安全不僅關系到人們的生命健康,而且關系到社會的穩定和諧.隨著社會飲食安全問題的頻繁出現,食品安全成為了人們的重要關注點.國家也進一步加強了對食品市場的整治力度,以提高食品安全,從而為人們提供一個安全的生活環境.雖然目前用于檢測沙門氏菌的方法都有優點和缺點,但隨著科技的發展,人們探索,繼續進行實踐,我們可以預期,將會有更多,更高的敏感性,特異性,診斷的新方法較短. 
     
    沙門氏菌、志賀氏菌的檢測
     
    10302 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液基礎 Tetrathionate Broth Base 250g/瓶  用于沙門氏菌選擇性增菌,每100ml培養基中添加 1支20315和1 支 20316a
    10303 亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液 Selenite Cystine Broth 250g/瓶  用于沙門氏菌選擇性增菌
    10304 亞硫酸鉍(BS)瓊脂 Bismuth Sulfite Agar 250g/瓶  用于沙門氏菌選擇性分離
    10305 HE 瓊脂 Hektoen Enteric Agar 250g/瓶 用于腸道致病菌的選擇性分離
    10306 木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊脂 Xylose Lysine Desoxycholate Agar 250g/瓶  用于腸道致病菌的選擇性分離
    10313 膽鹽硫乳瓊脂培養基(DHL) Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Medium 250g/瓶  用于腸道致病菌的選擇性分離
    10319 氯化鎂孔雀綠(RV)增菌液 Rappaport-Vassiliadis Medium 250g/瓶 用于沙門氏菌選擇性增菌
    10320 亞利桑那菌瓊脂(SA) Salmonella Arizona Agar 250g/瓶  用于亞利桑那菌的分離
    10321 WS 瓊脂 WS Agar 250g/瓶  用于沙門氏菌選擇性分離
    10322 RVS 肉湯 Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth 250g/瓶  用于沙門氏菌選擇性增菌
    10323 亮綠酚紅瓊脂 Brilliant Green/Phenol Red Lactose Agar 250g/瓶  用于沙門氏菌選擇性分離(GB、ISO、SN)
    10325 EF-18 瓊脂基礎 EF-18 Agar Base 250g/瓶  用于沙門氏菌濾膜法檢驗,每100ml 培養基中添加 1 支 20321
    10331 亮綠瓊脂培養基 Brilliant Green-Agar Medium 250g/瓶 用于藥品中沙門氏菌選擇性分離
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