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  • 已經配制好的培養基怎么滅菌?

    發布時間:

    2022-11-16

    作者:

    國產大的培養基企業


    已經配制好的培養基怎么滅菌?如何判定配制的培養基滅菌是否徹底?
    培養基干粉是有菌的,配置好后,如果不及時滅菌,細菌就會大量繁殖,消耗營養成分,導致培養基失去原有作用,所以必須及時滅菌。
    如果怕高壓不充分,滅菌不徹底,可一每次多配置一小份同樣的培養基,高壓后放置培養箱中,如果該小份培養基出現大量菌增殖現象,說明滅菌不充分;反之,則是無菌的。
    滅菌指示劑分為化學指示劑和生物指示劑。滅菌時將指示劑放入滅菌鍋中的不同部位一同滅菌,如果是化學指示劑則其顏色變化符合要求;生物指示劑(嗜熱芽胞桿菌)滅菌后進行培養為陰性。
    按培養基配方中規定的條件及時進行滅菌:普通培養基為121攝氏度20分鐘,以保證滅菌效果和不損傷培養基的有效成份。經滅菌后,如需要作斜面固體培養基,則滅菌后立即擺放成斜面,斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜;半固體培養基滅菌后,垂直冷凝成半固體深層瓊脂。 
    倒平板:將需倒平板的培養基,于水浴鍋中冷卻到45至50攝氏度,立刻倒平板。 
    滅菌是指殺死或消滅一定環境中的所有微生物,滅菌的方法分物理和化學滅菌法兩大類。本實驗主要介紹物理方法的一種,即加熱滅菌。 
    加熱滅菌包括濕熱和干熱滅菌兩種。通過加熱使菌體內蛋白質凝固變性,從而達到殺菌目的。蛋白質的凝固變性與其自身含水量有關,含水量越高,其凝固所需要的溫度越低。在同一溫度下,濕熱的殺菌效力比干熱大,因為在濕熱情況下,菌體吸收水分,使蛋白質易于凝固;同時濕熱的穿透力強,可增加滅菌效力。 
    高壓蒸汽滅菌用途廣,效率高,是微生物學實驗中最常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設計的。當蒸汽壓力達到1.05kg/cm2小時,水蒸氣的溫度升高到121攝氏度,經15至30分鐘,可全部殺死鍋內物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養基、玻璃器皿以及傳染性標本和工作服等都可應用此法滅菌。
    培養基滅菌注意事項:
    加水:打開滅菌鍋蓋,向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋用已煮開過的水,以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠,防止滅菌過程中干鍋。 
    裝料、加蓋:滅菌材料放好后,關閉滅菌器蓋,采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,使蒸汽鍋密閉,勿使漏氣。 
    排氣:打開排氣口,用電爐加熱,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,當有大量蒸汽排出時,維持5分鐘,使鍋內冷空氣完全排凈。 
    升壓、保壓和降壓:當鍋內冷空氣排凈時,即可關閉排氣閥,壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時,控制電壓以維持恒溫,并開始計算滅菌時間,待時間達到要求(一般培養基和器皿滅菌控制在121攝氏度,20分鐘)后,停止加熱,待壓力降至接近“0”時,打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣,否則會由于瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。 
    滅菌后的培養基空白培養:滅菌后放于37攝氏度培養箱中培養,經24小時培養無菌生長,可保存備用;斜面培養基取出后,立即擺成斜面后空白培養;半固體的培養基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后,空白培養。 
    干熱滅菌法:通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后,放入電烘箱中烘烤,即加熱至160至170攝氏度維持1至2銷售。 
    干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品,液體及固體培養基等都不能用此法滅菌。 
    滅菌前的準備:玻璃器皿等在滅菌前必須經正確包裹和加塞,以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內;三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙,用棉繩以活結扎緊,以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心,輕輕捅入管口,松緊必須適中,管口外露的棉花纖維統一通過火焰燒去,滅菌時將吸管裝入金屬管筒內進行滅菌,也可用紙條斜著從吸管尖 端包起,逐步向上卷,頭端的紙卷捏扁并擰幾下,再將包好的吸管集中滅菌。 
    干燥箱滅菌:將包扎好的物品放入干燥烘箱內,注意不要擺放太密,以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160至170攝氏度并恒溫1至2小時,注意勿使溫度過高,超過170攝氏度,器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿,溫度為120攝氏度持續30分鐘即可。溫度降至60至70攝氏度時方可打開箱門,取出物品,否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。 用此法滅菌時,絕不能用油、蠟紙包扎物品。 
    火焰滅菌:直接用火焰灼燒滅菌,迅速徹底。對于接種環,接種針或其它金屬用具,可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。此外,在接種過程中,試管或三角瓶口,也采用通過火焰而達到滅菌的目的。 
    日水培養基圖片
    來自:青島日水生物 qdrishui.cn
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